Les tests de PCR (réaction en chaîne par polymérase) sont une technologie de base dans le diagnostic moléculaire. La normalisation de ses processus d'emballage et de test a un impact directement sur la précision et la biosécurité des résultats. Cet article offre une perspective professionnelle sur les points de contrôle de la qualité clés tout au long du processus de test de PCR.
La réception des échantillons et le prétraitement sont les premières étapes du processus. Les laboratoires doivent vérifier strictement l'identification des échantillons, les conditions de transport et le temps de stockage pour assurer l'intégrité de l'échantillon. À la réception, les échantillons doivent être numérotés et enregistrés dans une armoire de biosécurité et subir des procédures de traitement pré - telles que la lyse et l'extraction d'acide nucléique basées sur le type de test. Un système de vérification de la personne - est requis au cours de cette étape pour empêcher la contamination croisée -.
La préparation du système de réaction de PCR doit être effectuée dans un banc propre. Les opérateurs doivent porter des équipements de protection de niveau 3 et utiliser des consommables gratuits de nucléase -. La préparation des réactifs adhère au principe du "flux de travail unidirectionnel", passant de la zone de préparation des réactifs à la zone de traitement de l'échantillon puis à la zone d'amplification. Les contrôles négatifs, les contrôles positifs et les contrôles internes doivent être inclus dans chaque lot de réaction pour surveiller la validité expérimentale.
Pendant la phase d'amplification et de test, l'instrument PCR doit être pré - calibré et paramètres de cyclisme de température vérifiés. La procédure de réaction comprend généralement trois étapes: dénaturation (94 - 95 degrés), recuit (50-65 degrés) et extension (72 degrés). Le nombre de cycles est ajusté en fonction de la cible de détection. La PCR de fluorescence en temps réel nécessite également de surveiller le seuil de signal de fluorescence des canaux spécifiques.
L'analyse et les rapports des résultats doivent être effectués par des techniciens qualifiés. Les données brutes doivent être examinées par au moins deux professionnels pour confirmer la morphologie de la courbe d'amplification, la plausibilité de la valeur CT et la conformité des matériaux de contrôle de la qualité avec les normes. Le rapport final doit inclure des informations sur la méthodologie de test, la base de l'interprétation des résultats et une déclaration de limitations de test.
L'ensemble du processus adhère strictement à l'ISO 15189 et aux spécifications CDC pertinentes. Un système de surveillance environnementale, la maintenance de l'équipement et la formation du personnel de l'équipement sont mis en œuvre pour assurer la fiabilité et la traçabilité des tests de PCR.